原代內膜細胞培養體系是一個為體外生長的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動物器官中的內膜細胞設計的理想的完培方案。本體系是一個基于碳酸氫鹽的緩沖體系,可以在孵育的5%的CO2的氣體環境下維持一個圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個無菌的液體混合系統,其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、生長因子、微量元素和一些其他的有機和無機化合物以及胎牛血清(10%)。本培養體系是基于固定配方配制的液態培養體系,可以為體外培養的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動物器官中的內膜細胞提供一個確定適宜的平衡營養環境,并且可以選擇性的促進內膜細胞的擴增。
細胞貼壁障礙:
貼壁率低或漂浮
原因:
消化過度(胰酶濃度過高或時間過長)損傷細胞表面蛋白;
培養器皿未包被或包被不當,缺乏細胞外基質支持;
血清濃度不足(<5%)或貼壁因子缺失;
操作溫度過低導致細胞收縮脫落。
解決:
改用低濃度胰酶(0.04%-0.05%)并嚴格控制消化時間;
使用膠原蛋白(0.1%)、明膠或纖連蛋白包被培養皿;
血清濃度提升至5%-10%(需根據細胞類型調整);
預熱培養基至37℃,操作環境維持25℃以上。
傳代后貼壁失敗:
原因:
傳代比例過大(如1:4以上),細胞密度過低無法分泌足夠基質;
殘留消化酶損傷或誘導凋亡。
解決:
控制傳代比例為1:2至1:3,接種后24小時內靜置培養;
中和胰酶(推薦無血清胰酶抑制劑)。