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乙酰膽堿轉移酶(ChAT)測試盒說明書

發布時間:2023/3/5點擊次數:576

乙酰膽堿轉移酶(ChAT)測試盒說明書

(測組織)

 

一、測定原理:

膽堿移酶(choline acetyltransferase    ChAT)定是乙酰A 堿為物,在 ChAT 的作用下,反應的生成物和顯色劑結合,在 324nm 處測定吸光度,以此計算 ChAT 的活力。

二、試劑組成與配制(40 /20 )

試劑一:液體 6mL×1 瓶,4℃保存。室溫低時會有結晶析出,測試前 37℃水浴至澄清。

試劑二:粉劑×1 支,臨用前加 220μL 的蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃以下保存。

試劑三:粉劑×1 支,臨用時每支加雙蒸水 440μL,用不完的試劑-20℃以下保存。

試劑四:液體×1 支,臨用前每支用雙蒸水 1:1 稀釋,4℃保存。

試劑五:液體×1 支,4℃保存。

試劑六:液體×1 支,4℃保存。試劑七:液體×1 支,4℃保存。

三、操作步驟:

1、樣本前處理:


10%勻漿液的制備:準確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=19 的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,2500 /分,離心 10 分鐘,取上清液,再用生理鹽水 2 倍稀釋后測定;

2、操作表:


測定管

對照管

試劑一(μL

105

105

試劑二(μL

5

5

試劑三(μL

10

10

試劑四(μL

10

10

試劑五(μL

10

10

試劑六 (μL)

10

10

混勻,37°C 水浴預溫   5 分鐘

5%的組織勻漿上清(μL

25

(煮沸的勻漿上清)25

混勻,37°C 水浴 20 分鐘,100°C 沸水水浴 2 分鐘終止反應

蒸餾水 (μL

425

425

混勻,4000   r/min×10min 離心后取上清進行顯色反應

上清  μL

500

500

試劑七(μL

10

10

混勻,靜置   15   分鐘,在 324nm   處,用 1cm   光徑,2mm   內徑的石英比色皿,蒸餾

水調零,測定各管的吸光度值。



四、測定意義:

乙酰膽堿 Ach 是調節食道平滑肌運動的主要的興奮性神經遞質。食道平滑肌收縮主要是由于 Ach 釋放引起。而乙酰膽堿轉移酶(Choline acetyltransferase ChAT)和乙酰膽堿脂酶(Acetylcholinesterase ACHE)分別是

Ach 的合成酶和水解酶,調節 Ach 的代謝。食道組織中這兩個酶的活力代表了食管內源性膽堿能神經功能狀態。

乙酰膽堿是延髓脊髓運動神經元,自主神經系統神經節前纖維,神經節后膽堿能(副交感神經)纖維,以   及中樞神經系統內許多神經元(例如基底節,大腦運動區皮層)的主要神經遞質。它是通過膽堿乙酰轉移酶的   作用,由膽堿與來自線粒體的乙酰輔酶 A 所合成。在獲得釋放后,乙酰膽堿刺激特殊的膽堿能受體,這種相互作用很快被局部的膽堿酯酶所終止,后者使乙酰膽堿被水解為膽堿與乙酸鹽。乙酰膽堿的水平由膽堿乙   酰轉移酶和膽堿的攝取所調控。

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