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甘油三酯(triglyceride, TG)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2023/5/11點(diǎn)擊次數(shù):469

甘油三酯(triglyceride, TG)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

                                                

                                               微量法100T/96S

 

 

   正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

TG是長(zhǎng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不僅是細(xì)胞膜的主要成分,也是重要呼吸底物。

 

測(cè)定原理:

用異丙醇提取TG,脂蛋白酯酶水解TG生成甘油和脂肪酸(FFA),甘油與三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成H2O2過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在505 nm處有特征吸收峰。

 

自備儀器和用品:

酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

 

試劑組成和配置:

試劑一:液體120 mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體12 mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體12 mL×1瓶,4℃避光保存。

 

TG的提取:

1、   組織中TG的提取:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,8000g4℃離心10min,取上清,即TG待測(cè)液。

2、細(xì)胞、細(xì)菌中TG的提取:先收集400-500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),離心后棄上清,加1mL試劑一,超聲波破碎1min(強(qiáng)度20%,超聲2s,停1s8000g4離心10min,取上清,即TG待測(cè)液。

3、血清(漿)樣品:直接測(cè)定。

 

測(cè)定操作:

酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到505 nm

試劑(μL

空白管

測(cè)定管

樣本


10

試劑一

10


試劑二

95

95

試劑三

95

95

混勻,室溫下靜置20min,于505 nm波長(zhǎng)處讀取吸光值,記為A空白和A測(cè)定,A=A測(cè)定-A空白。空白管只需測(cè)一管。


 

計(jì)算公式:

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.3261x - 0.0199 R2 = 0.9979x標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL y:吸光值差值ΔA

1. 血清(漿)中甘油三酯含量計(jì)算:

TG含量(mg/mL=ΔA+0.0199÷ 0.3261=3.07×ΔA+0.0199

2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中甘油三酯含量計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

TG含量(mg/ mg prot= (ΔA+0.0199)÷0.3261×V÷(Cpr×V樣)=3.07×ΔA+0.0199÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

TG含量(mg/ g 鮮重)=ΔA+0.0199÷0.3261×V÷(W×V÷V樣總)=3.07×ΔA+0.0199÷ W

V樣:加入樣本體積,0.01 mLV樣總:加入試劑一體積,1 mLW:樣本質(zhì)量,g

Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL

 

注意事項(xiàng):

1. 試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需佩戴手套和口罩,試劑瓶蓋打開后應(yīng)該及時(shí)蓋緊。

2. Z低檢出限為100μg/mL

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