植物葉綠素（chlorophyll）含量試劑盒說明書

微量法100T/96S

注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

植物葉綠素廣泛存在于綠色植物組織中，其含量與光合作用、營養(yǎng)狀況密切相關，是反應植物生長狀況的重要指標。

測定原理：

葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有最大吸收，根據經驗公式可計算得葉綠素a和葉綠素b以及總葉綠素含量。

自備實驗用品及儀器：

天平、研缽、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、10mL玻璃試管、錫箔紙、丙酮。

試劑組成和配制：   

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。         

測定操作：

1.        稱取約新鮮植物葉片或其它綠色組織，去掉中脈，稱取約0.1g，剪碎，用蒸餾水洗干凈。

2.        提取液的準備：取240mL蒸餾水和960mL丙酮，充分混勻待用。

3.        加入1mL蒸餾水，少量試劑一（約50mg），在黑暗或弱光條件下充分研磨，轉入10mL玻璃試管。

4.        用提取液沖洗研缽，將所有沖洗液轉入玻璃試管，用提取液補充至10mL，玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提3h，觀察試管底部組織殘渣wan全變白則提取wan全，若組織殘渣未wan全變白，繼續(xù)浸提至其wan全變白。

5.        取浸提液200μL于微量石英比色皿/96孔板，提取液調零，測定663nm和645nm處吸光值，分別記為A₆₆₃和A₆₄₅ 。

計算公式：

葉綠素a含量（mg/g 鮮重）=（12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅）×D÷m

葉綠素b含量（mg/g 鮮重）=（22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃）×D÷m

葉綠素總含量（mg/g 鮮重）=（20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃）×D÷m

V提：提取液體積，10mL；D：稀釋倍數；m：樣本質量，g

注意事項：

1.        葉綠素對光敏感，研磨和提取等操作盡量避光或者在弱光下進行。

2.        一定要浸提至組織殘渣wan全變白，否則提取不充分。

3.        用提取液沖洗研缽一定要沖洗至所有的綠色物質被轉移至玻璃試管。

        4.  測定時吸光值超過1，可進行適當稀釋。