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堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性測定試劑盒

產品簡介

堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性測定試劑盒測定意義:
AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

產品型號:
更新時間:2025-06-20
廠商性質:生產廠家
訪問量:991
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堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性測定試劑盒說明書

                                                   微量法100T/48S



   正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:                           

AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

 

測定原理:

在堿性環(huán)境中,AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與4-氨基安替/比林和鐵氰hua鉀反應紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過測定510 nm吸光度增加速率,來計算AKP活性。

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。

試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。

標準品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標準液,4℃保存。

 

粗酶液提取:

1.        組織:按照組織質量(g:試劑一體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿48000g離心10min,取上清液待測。

2.        細菌或細胞:按照細菌或細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g4,離心10min,取上清置于冰上待測。

3.        血液可直接測定,或者適當稀釋后測定。

 

測定步驟:

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節(jié)波長到510 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min

3. 空白管:EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A空白管。

4. 標準管:EP管,加入4μL標準品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A標準管。

5. 對照管:EP管,加入4μL上清液,40μL蒸餾水,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。

6. 測定管:EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min

 

加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。

其中標準管和空白管只需做一管,測定管和對照管每個樣均需做。

注意:空白管和標準管只需測定一次。

 

AKP/ALP活性計算:

1.        血液中AKP/ALP活力計算

活性單位定義:37中每毫升血液每分鐘催化產生1μmol酚定義為1個酶活單位。

AKP/ALP活力(μmol/min /mL)= [C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V反總] ÷V÷T=6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)

2.        組織、細菌或細胞中AKP/ALP活性計算

1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:37中每毫克蛋白每分鐘催化產生1 μ mol酚定義為1個酶活單位。

AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V反總]÷(Cpr×V)÷T=6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) ÷Cpr

2)按照樣本質量計算

活性單位定義:37中每克組織每分鐘催化產生1 μ mol酚定義為1個酶活單位。

AKP/ALP(μmol/min/g 鮮重)=[C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V反總]÷(W×V÷V樣總)÷T=6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) ÷W

3)按照細菌或細胞數(shù)量計算

活性單位定義:37中每104個細菌或細胞每分鐘催化產生1 μ mol酚定義為1個酶活單位。AKP/ALP (μmol/min/104 cell)= [C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V反總]÷(細胞數(shù)量×V÷V樣總)÷T= 6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) ÷細胞數(shù)量

 

C標準品:2μmol/mLV反總:反應體系總體積(mL),205μL=0.205mL Cpr:粗酶液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司生產的BCA蛋白質含量測定試劑盒;W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積(mL),0.004mLV樣總:提取液體積,1 mLT:反應時間(min),15 min

 

注意事項:

1.試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。

2.試劑四變藍綠色后不能再使用。

3.加入試劑四后必須立即混勻,否則顯色不wan全。

堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性測定試劑盒僅供科研!

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