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羧酸酯酶(CarE)活性測定試劑盒

產品簡介

羧酸酯酶(CarE)活性測定試劑盒測定意義:
哺乳動物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲氨/酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內源性與外源性物質水解,但不能催化水解乙酰膽/堿及其類似物。CarE參與脂質運輸和代謝,并且與多種藥物、環境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關,有機磷農藥可結合并且抑制CarE活性。

產品型號:
更新時間:2025-06-19
廠商性質:生產廠家
訪問量:1020
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羧酸酯酶(CarE)活性測定試劑盒說明書

                                               微量法 100T/96S

 

 

   正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

哺乳動物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲/氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內源性與外源性物質水解,但不能催化水解乙酰膽/堿及其類似物。CarE參與脂質運輸和代謝,并且與多種藥物、環境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關,有機磷農藥可結合并且抑制CarE活性。

 

測定原理:

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固籃顯色;在450 nm光吸收增加速率,計算CarE活性。

 

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍和蒸餾水。

 

試劑組成和配置:

試劑一:液體×1瓶,4保存。

試劑二:液體15mL×2瓶, 4℃保存;

試劑三:粉劑×2支, 4℃保存,臨用前取1支試劑三,加0.6ml無水乙醇充分溶解;

試劑四:粉劑×2支,-20℃保存,臨用前取1支試劑四,加少量試劑二溶解;

工作液配制:臨用前配制,向1瓶試劑二中,加入溶解后的試劑三和試劑四各1支,充分溶解,過濾,4℃避光保存,可用1周。

 

粗酶液提?。?/span>

細菌、細胞樣品制備

收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每200萬細菌或細胞加入400μL試劑一,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);12000g 4離心30min,取上清液待測。

2、組織:按照組織質量(g:試劑一體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿12000g 4離心30min,取上清液待測。

3、液體:直接測定

 

測定操作:

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長到450 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑二置于37水浴中預熱30 min。

3. 空白管:微量玻璃比色皿/96板,依次加入5μL蒸餾水和200μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測定3min內吸光值變化,第10s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2。A空白管=A2-A1

4. 測定管:取微量玻璃比色皿/96板,依次加入5μL上清液和200μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測定3min內吸光值變化,第10s吸光值記為A3,第190s吸光值記為A4。A測定管=A4-A3

 

注意:空白管只需測定一次。

 

CarE活性計算公式

a.        使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1 組織中CarE活性

(1)         按蛋白濃度計算

CarE活性單位定義:mg組織蛋白在37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1酶活單位。

 

CarE酶活(U/mg prot)= (A測定管-A空白管) ×V反總÷(Cpr×V)÷T

= 13.67×(A測定管-A空白管)÷Cpr

(2)         按樣本鮮重計算

CarE活性單位定義:g組織在37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1酶活單位。

CarE酶活(U/g 鮮重)= (A測定管-A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷W÷T

=13.67×(A測定管-A空白管)÷W

2 細菌或細胞中CarE活性

CarE活性單位定義:1萬個細菌或細胞在37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為一個CarE活性單位。

CarE酶活(U/104 cell)= (A測定管-A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷細胞密度(104 cell/mL÷T=13.67×(A測定管-A空白管細胞密度(104 cell/mL

3. 液體中CarE活性

CarE活性單位定義:毫升樣品37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1酶活單位。

CarE酶活(U/mL )= (A測定管-A空白管) ×V反總÷V÷T

=13.67×(A測定管-A空白管)

V反總:反應體系總體積,205μL=2.05×10-4L;V樣總:上清液總體積,1 mLV樣:加入上清液體積(mL),0.005 mL;Cpr:蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量(g);T:反應時間(min),3min。

 

b.       使用96孔板測定的計算公式如下

1 組織中CarE活性

(3)         按蛋白濃度計算

CarE活性單位定義:mg組織蛋白在37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1酶活單位

 

CarE酶活(U/mg prot)= (A測定管-A空白管) ×V反總÷(Cpr×V)÷T

= 13.67×(A測定管-A空白管)÷Cpr

(4)         按樣本鮮重計算

CarE活性單位定義:g組織在37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1酶活單位。

CarE酶活(U/g 鮮重)= (A測定管-A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷W÷T

=13.67×(A測定管-A空白管)÷W

2 細菌或細胞中CarE活性

 

CarE活性單位定義:1萬個細菌或細胞在37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為一個CarE活性單位。

CarE酶活(U/104 cell)= (A測定管-A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷細胞密度(104 cell/mL÷T=13.67×(A測定管-A空白管細胞密度(104 cell/mL

3. 液體中CarE活性

CarE活性單位定義:毫升樣品37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1酶活單位。

CarE酶活(U/mL )= (A測定管-A空白管) ×V反總÷V÷T

=13.67×(A測定管-A空白管)

V反總:反應體系總體積,205μL=2.05×10-4LV樣總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入上清液體積(mL),0.005 mL;Cpr:蛋白質濃度,mg/mLW:樣品質量(g);T:反應時間(min),3min


羧酸酯酶(CarE)活性測定試劑盒僅供科研!


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