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酸性磷酸酶(ACP)活性測定試劑盒

產(chǎn)品簡介

酸性磷酸酶(ACP)活性測定試劑盒測定意義:
ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸,常見于巨噬細胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。

產(chǎn)品型號:
更新時間:2025-06-19
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
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酸性磷酸酶ACP活性測定試劑盒說明書

                                                      微量法100T/48S



    意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:                           

ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸,常見于巨噬細胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。

 

測定原理:

在酸性環(huán)境中,ACP催化對硝基苯磷酸二鈉水解生成4-硝基苯/酚,在405nm有特征光吸收;通過測定405nm吸光度增加速率,來計算ACP活性。

 

自備儀器和用品:

酶標儀、96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體60 mL×2瓶,4保存。

試劑二:液體50 mL×1瓶,4保存。

試劑三:液體50 mL×1瓶,4保存。

 

粗酶液提取:

1.        組織:按照組織質(zhì)量(g:試劑一體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1 mL試劑一)進行冰浴勻漿410000g離心10 min,取上清液待測。

2.        細菌或細胞:按照細菌或細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1 mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3 min);然后10000g4,離心10min,取上清置于冰上待測。

3.        血液可直接測定,或者適當稀釋后測定。

 

測定:

1. 酶標儀預熱30 min,調(diào)節(jié)波長到405 nm

2. EP 管中加入下列試劑

試劑名稱(μL

測定管

對照管

樣本

10

10

試劑一

90

990

試劑二

900


30℃避光保溫30 min

試劑三

400

400

混勻,吸取 200µL 加入96 孔板中,405 nm 下測定各管吸光值。ΔA=A測定管-A對照管。

注意:每個測定管需做一個對照管。

 

ACP活性計算:

標準曲線 y = 7.3336x + 0.0179R2 = 0.9996x為標準品濃度(μmol/mL),y為吸光值ΔA

1. 血液中ACP活性計算

活性單位定義:30℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯/酚定義為1個酶活單位。

ACP活力(μmol/min/mL)=ΔA-0.0179÷7.3336 ×V反總÷T÷V

= 0.4545 ×ΔA-0.0179

2. 組織、細菌或細胞中ACP活性計算

1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:30中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 μmol 4-硝基苯/酚定義為1個酶活單位。

ACP活力(μmol/min/mg prot)= (ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷(V×Cpr)

=0.4545 ×ΔA-0.0179÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:30℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol 4-硝基苯/酚定義為1個酶活單位。

ACP活力 (μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷(W×V ÷V 樣總)

= 0.4545 ×ΔA-0.0179÷W

3)按照細菌或細胞數(shù)量計算

活性單位定義:30℃中每104個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol 4-硝基苯/酚定義為1個酶活單位。

ACP 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷(細胞數(shù)量×V ÷V 樣總

= 0.4545 ×ΔA-0.0179÷細胞數(shù)量

V反總:反應(yīng)體系總體積(mL),1 mL W :樣品質(zhì)量,g V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積(mL),0.01 mLV樣總:提取液體積,1 mLT:反應(yīng)時間(min),30 min500:細胞或細菌總數(shù),500萬。

 

注意事項:

ACP不穩(wěn)定,尤其在37℃pH大于7的條件下活力喪失快,因此酸性磷酸酶樣品一般需當天準備;血清樣品中,每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫酸氫鈉,使pH降至6.5以下,或5ml血清加入30%醋酸溶液23滴,置于4℃可保存1周。

酸性磷酸酶ACP活性測定試劑盒僅供科研!

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